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樣本類型：小鼠肺組織（Lung）、小腸固有層（ small intestine lamina propria, siLP）

抗體方案：

圈門策略：

實驗結果：

首先通過FSC-A/SSC-A圈出主細胞群體，F(xiàn)SC-A/FSC-H去除粘連體，SSC-B-A/SSC-A去除紅細胞干擾，在活細胞下圈出CD45+群體，通過IL-7Rα+lin-圈出總的ILCs（FigA-B）。

在肺組織的總ILCs中，通過PLZF+IL-18Rα+圈出ILCP（FigC）。

分別在肺組織（FigD）和siLP（FigE）中對ILC亞群進行細致地劃分：首先通過RORγ和T-bet雙散點圖區(qū)分出T-bet+ RORγt-、T-bet-RORγt-、T-bet+/-RORγt+三個群體：

1. 在T-bet+ RORγt-群體下通過CD49b-ST2-NKP46+IL18Rα+識別出ILC1細胞，同時通過TRAIL和CD49a可將ILC1繼續(xù)細分成TRAIL+ILC1細胞和CD49a+ILC1細胞；

2. 在T-bet-RORγt-群體下GATA3+可成功圈出ILC2細胞，繼續(xù)通過ST2和KLRG1可將ILC2細胞細分成KLRG1-ILC2、KLRG1+ILC2和ST2-ILC2;

3. 在T-bet+/-RORγt+去群體下，通過NKP46和CCR6可將ILC3進一步分成NCR+ILC3（NKP46+CCR6-）、NCR-ILC3（NKP46-CCR6-）和CCR6+ LTi-like ILC3（NKP46-CCR6+）。

為了研究小鼠肺組織（FigF）和siLP（FigG）的細胞因子分泌及增殖情況，使用激活劑和特異細胞因子對細胞進行了體外激活培養(yǎng)。經過刺激后，肺組織中的ILC1產生了大量的IFN-γ；siLP中ILC2和ILC3的IL-13和IL-22有明顯的上升趨勢。

此方案不僅可以對ILCPs和ILC的3個亞群進行定義，而且可以利用方案中CD11b實現(xiàn)對成熟NK細胞（表型為CD11b⁺NKp46⁺T-bet⁺）研究（FigH）。同時加入特異性細胞因子和增殖標記物來分析ILC和NK細胞的功能特征。全面多維度分析小鼠組織中不同ILCs的表型和功能狀態(tài)的特點，充分展示這個方案的多樣性和靈活性。

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