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細(xì)胞外囊泡(EVs)是指在生理和病理狀態(tài)下,機(jī)體內(nèi)細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞吞咽形成作用多泡小體后,通過(guò)細(xì)胞膜融合到細(xì)胞外環(huán)境中的微小囊泡,根據(jù)囊泡尺寸大小,可將EVs分為三類:凋亡小體(>1000 nm)、微囊泡(100~1000 nm)、外泌體(30~100 nm)。大量研究表明細(xì)胞死亡的EVs也出現(xiàn)異常;其內(nèi)部的多種分子顯著改變。與傳統(tǒng)的疾病診斷標(biāo)志物相比,EVs可在體液中穩(wěn)定存在且半期衰長(zhǎng),加之堿雙分子層的保護(hù)作用,EVs可定量輸送RNA和蛋白質(zhì)等生物信息分子至吸取細(xì)胞,且EVs廣泛分布于體液中,取材方便,創(chuàng)傷小,因此EVs有可能成為一種新型的疾病診斷標(biāo)志物。EVs仍屬于一個(gè)較新的領(lǐng)域,Vs形態(tài)學(xué)常用的檢測(cè)方法有頭部電子顯微鏡、動(dòng)態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀(Nanosight)、Western blot、流式分析技術(shù)等。其中頭部電子顯微鏡技術(shù)可直接觀察EVs形態(tài),但對(duì)樣品質(zhì)量要求較高、實(shí)驗(yàn)前處理復(fù)雜且實(shí)驗(yàn)中較難洞察EVs和精度顆粒。動(dòng)態(tài)光掩模和Nanosight可反映EVs的大小分布,Nanosight可直接檢測(cè)EVs的濃度,但要求樣本采樣高,無(wú)法區(qū)分大小不同聚集體、批量溶液及EVs。Western blot實(shí)驗(yàn)只能對(duì)EVs進(jìn)行定性;無(wú)法避免細(xì)胞蛋白的污染,直至蛋白找到EVs特有的蛋白質(zhì)標(biāo)志物。流式技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn),高蛋白、單顆粒、同時(shí)檢測(cè)多個(gè)參數(shù)的分析,是目前最具潛力評(píng)價(jià)臨床的外泌體分析技術(shù)。傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)下限為500納米,外泌體多被當(dāng)成噪音而忽略。近年來(lái)不斷開發(fā)新技術(shù)來(lái)滿足外泌體分析要求,將檢測(cè)提高到20納米,最大限度提升了流式技術(shù)分析外泌體的能力,確認(rèn)和解決將不會(huì)再成為流式技術(shù)分析外泌體的瓶頸。目前,困擾流式技術(shù)分析外泌體的問(wèn)題同樣如此集中,樣品的前處理、流式方法的標(biāo)準(zhǔn)化、外泌體標(biāo)志物的尋找。廣州煥彩流式實(shí)驗(yàn)室在囊泡檢測(cè)方法學(xué)通過(guò)傳統(tǒng)流式進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)測(cè)試和方法學(xué)改進(jìn),不斷完善方法學(xué)。
所用儀器型號(hào)
3激光14色流式細(xì)胞儀LongCyteTM
關(guān)于層浪流式細(xì)胞儀
一、靈敏度高
微小粒子可以檢測(cè)
二、省錢多能手——自動(dòng)進(jìn)樣無(wú)需單獨(dú)配備
三、具有計(jì)數(shù)功能,精準(zhǔn)高效,無(wú)需輔助耗材
四、小巧可愛(ài)又高配多能
層浪生物公眾號(hào)
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